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    你知道細胞轉染實驗中轉染效率低的原因嗎?

     更新時間:2024-05-22 點擊量:119

    轉染細胞效率低下的原因在生物醫學研究中,將外源基因導入細胞以研究其功能或使細胞展現出新的特性是非常常見的實驗手段。然而,轉染細胞的效率低下一直是科研人員面臨的一大難題。今天小編將探討轉染細胞效率低下的原因,以期為提高轉染效率提供有益的思路。

    1.細胞類型和狀態  

    不同的細胞類型具有不同的轉染效率。一些難轉染的細胞,如神經元和肝細胞,通常需要更復雜的轉染技術。此外,細胞的生長狀態也會影響轉染效率,處于對數生長期的細胞更容易接受外源基因。如果是貼壁細胞的話,貼壁率應該在70-80%;如果是懸浮細胞的話,應該是6X105/孔(24孔板),一般是轉染前一天換液,轉染前用無血清培養基或PBS洗細胞一次。轉染的整個過程都不應該有抗生素。

    2.轉染方法

    選擇合適的轉染方法對提高轉染效率至關重要。常用的轉染方法包括化學法、物理法和生物法。每種方法都有其優缺點,適用于不同的細胞類型和實驗需求??蒲腥藛T應根據自己的實驗條件和要求選擇適合的轉染方法。

    3.轉染試劑

    轉染試劑的質量和濃度直接影響轉染效率。一些劣質的轉染試劑可能導致細胞毒性過大,從而降低轉染效率。因此,選擇高質量的轉染試劑是提高轉染效率的重要因素。

    4.基因載體

    基因載體的種類和結構對轉染效率具有重要影響。不同的基因載體適用于不同的細胞類型和實驗需求。此外,基因載體的包裝和滴度也會影響轉染效率。

    5.培養條件

    細胞培養條件,如培養基、血清和添加劑的質量以及培養溫度和濕度等,都會影響細胞的生長狀態和活力,從而影響轉染效率。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養基。也可以在原來的無血清培養基里面滴加血清

    6.轉染用的質粒也要保證數量和質量,一般要高于2 μg以上。如果質粒純度不夠或含有對細胞有毒害的物質,會影響轉染效率。

    7.操作手法

    脂質體和DNA/RNA混合物應當一滴一滴地滴下來,從培養皿一邊滴到另一邊,邊滴邊輕搖培養皿,以確保均勻分布和避免局部高濃度。這些都是一些細枝末節,但是,如果不注意的話,影響轉染效率。

    以上就是有關于細胞轉染實驗中轉染效率低的原因的問題解答,如果你還想了解更多請咨詢百奧創新客服!


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